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Zytogenetische Mindeststandards

Erstellt von: Hellenbrecht (Infozentrum Projekt 2) , am: 09.02.2007, letzte Änderung: 12.02.2008

Autor: Prof. Dr. Harald Rieder, Universität Düsseldorf

Mindeststandards

für die Herstellung von Chromosomenpräparaten aus Knochenmark und peripherem Blut bei akuten und chronischen Leukämien

Im Rahmen eines Expertentreffens des Teilprojektes 5 "zentrale Zytogenetik" der Kompetenznetzes Leukämie wurde beschlossen, Minimalanforderungen für die Kultivierung und Chromosomen-Präparation von Knochenmark und peripherem Blut zu erarbeiten. Diese Minimalanforderungen, die von jedem Labor, das sich mit der Chromosomenbandenanalyse bei Leukämien beschäftigt, eingehalten werden sollten, werden im Folgenden dargestellt.

Mindeststandards (12KB)

konsensusprotokoll.pdf

*Stimulation mit Cytokinen

Einzusetzende Zellzahl: ca. 2,5x106 bis 1x107 Zellen pro ml Medium.

Eingesetztes Medium: 80% RPMI + 20% FCS + Antibiotikum; entweder Mix frisch ansetzen, nach dem Aliquotieren kurzzeitig im Kühlschrank (+4°C) oder länger im Tiefkühlschrank (-20°C) aufbewahren.

Antibiotikum-Konzentration: 1 - 1,4 Vol%

Kulturgefäße: 5 - 10 ml Kulturmedium in Zentrifugenrörchen (verschlossen, schräg gestellt) oder Zellkultur-Fläschchen (verschlossen).

Colcemid-Zeit: Kurzzeit-Colcemid bei allen 24h, 48h und 72h-Kulturen; bei den 48h-Kulturen fakultativ Langzeit-Colcemid.

Hypotoner Schock: 15 - 25 min bei Raumtemperatur oder im 37°C Wasserbad.

Erste Fixierung: Temperatur des FIXATIV: -20°C; Vorsichtiges Eintropfen des 1. Fix bzw. Vorfixierung.

Objektträger: entfettet (in Alkohol), kalt und naß.

Auftropfen: bei hoher Luftfeuchtigkeit (mind. 40%), z.B. über Wasserdampf oder in feuchter Kammer.